Biosynthese und Funktion von Molybdopterin in Neurospora Dr. Immanuel Heck, Prof. Dr. Helga Ninnemann

Forschungsschwerpunkt

Im Zusammenhang mit der Untersuchung der Nitratreduktase als Blaulichtphotorezeptor in Neurospora crassa untersuchten wir in den vergangenen Jahren auch die Biosynthese ihres MolybdΣncofaktors. Als Pterin kommt der organische Anteil dieses Cofaktors, das Molybdopterin, sowohl als Chromophor (▄bereinstimmungen mit dem Aktionsspektrum des Photorezeptors) als auch als Bestandteil der Signaltransduktionskette (Redoxeigenschaften) in Frage. Bei molybdopterindefizienten Mutanten fehlte die typische Bildung einer zusΣtzlichen Konidienbande nach Blaulichtbestrahlung. Biochemische Untersuchungen mittels in vitro MPT Biosynthese erlaubten die Charakterisierung eines Teils der Biosyntheseschritte. Auch das in sogenannten molybdatreparablen Mutanten gest÷rte assembly der Nitratreduktase ergab den photorezeptordefizienten PhΣnotyp. Neben der weiteren Entwicklung von HPLC-gestⁿtzten Testsystemen beginnen wir nun mit der Isolierung der Gene, um eine direkte Beeinflussung der durch die Nitratreduktase vermittelten Blaulichtrezeption vornehmen zu k÷nnen.

Methoden in der Anwendung

 

- Photobiologische Untersuchung des Einflu▀es von Molybdopterin-Biosynthese-Mutationen auf die Signaltransduktion der blaulichtverstΣrkten Konidienbildung bei Neurospora crassa in Schalenversuchen

- Klonierung und Sequenzierung von Molybdopterin-Biosynthesegenen aus Neurospora crassa

- HPLC-Reinigung und chemische Charakterisierung von Zwischenprodukten der Molybdopterin-Biosynthese

- Proteinreinigung und Analyse der Eigenschaften von Nitratreduktase

 

Zusammenarbeit :

Prof. David H. Boxer, Department of Biochemistry, Medical Sciences Institute, Dundee University, Dundee, Tayside, Scotland, DD1 4HN, UK

Publikationen

Heck, I.. 1990. Reinigung der Nitratreduktase von Neurospora crassa al-2 bd und Abgrenzung fluoreszierender Oxidationsprodukte ihres MolybdΣn-Kofaktors von vergleichbaren fluoreszierenden Substanzen des zellfreien Extrakts.

Heck, I. and H. Ninnemann (1993) Presence of converting factor activity in molybdopterin-deficient nit -mutants of Neurospora crassa . 5th Congress of the European Society for Photobiology, p. 56 (I/P4).

Heck, I. S. and H. Ninnemann (1995) Molybdenum cofactor biosynthesis in Neurospora crassa : biochemical characterization of pleiotropic molybdoenzyme mutants nit-7 nit-8 nit-9A , B and C. Photochem. Photobiol. 61 , 54-60.

Heck, I.. 1995. Biosynthese des MolybdΣn-Cofaktors in Neurospora crassa : Biochemische Charakterisierung der pleiotropen Mutanten nit-7 , nit-8 , nit9 A, nit-9 B und nit-9 C sowie Untersuchungen ⁿber den Zusammenbau der Nitratreduktase.

Adresse

Dr. Immanuel Heck

Institut fⁿr Pflanzenbiochemie, Corrensstr. 41, D-72076 Tⁿbingen

Tel.: 07071-29-76399

Fax: 07071-640019

e-mail: immanuel.heck@uni-tuebingen.de(immanuel.heck@uni-tuebingen.de)

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